手机版 欢迎访问华清诚信添加剂资讯网(www.hqcx.com)网站

当前位置:主页 > 胶体专题 >

金金免疫分析技术详解(一)和斑点免疫层析分析DICA

时间:2021-07-24 16:25:39|浏览:

胶体金免疫分析技术详解。随着免疫分析在临床和非临床诊断行业的应用越来越广泛,免疫分析正朝着两个方向发展:一是全自动免疫分析;另一种是以硝酸纤维素膜为载体的快速免疫测定。前者需要昂贵的全自动仪器和与仪器严格匹配的各种套件。目前只能在医疗和检测中心使用。虽然可以很快给出结果,但还是需要一定的时间,不适合远离医疗和检测。中心区域不能用于“患者即时检测”和人口普查的需要。在酶免疫分析的基础上,以硝酸纤维素膜为载体的快速诊断方法得到了迅速而广泛的发展。文献中对此类方法的命名与市场上仍十分不一致。它实际上属于快速点免疫组合分析,主要有两种方法:点免疫过滤分析DIFA和点免疫层析分析DICA。本文主要介绍以金为标志物的胶体金免疫分析技术。金标记免疫分析技术,又称免疫胶体金技术,是1971年建立的一种信号显示技术。该技术最初用于免疫电镜,其中胶体金颗粒标记抗原或抗体,并与组织中相应的抗体或抗原结合或细胞,它们可以在电子显微镜下发挥特定的示踪作用。此后,该技术与银染技术相结合所建立的免疫金-银染色方法,可以在光学显微镜下观察抗原-抗体特异性反应信号。近10年来,以硝酸纤维素膜(NC)为固相载体,在膜上进行胶体金标记的抗原或抗体与特异性配体的反应,快速金标免疫过滤技术和金标免疫过滤技术已经确立。标记免疫层析技术,广泛应用于传染病、心血管疾病、风湿病和自身免疫性疾病的免疫学检测。

胶体金是指将金粒子(0-100nm)分散在另一种物质中形成的体系。通常是指金颗粒分散在溶液中形成的金溶胶。这种金溶胶用于标记蛋白质(抗原、抗体或SPA、SPG),胶体金颗粒具有电子密度高的特点,因此在金的抗原抗体结合位点显微镜下可以看到深褐色颗粒。标记的蛋白质;当这些标志物在相应标志物处大量聚集时,可在载体膜上呈现红色或粉红色斑点,可用于抗原或抗体物质的半定量或定性分析。与ELISA不同的是反应时间大大缩短。只需几分钟即可完成需要数小时才能显示的 ELISA 结果。因为在GIFA和GICA中,高浓度抗体被浓缩固定在纤维素的微孔中,在渗滤或层析过程中,待测抗原流过微孔与固定的高浓度抗体紧密接触,快速完成免疫结合。反应。这就是基于膜的胶体金快速免疫测定的免疫浓缩作用。在ELISA中,待测抗原在液相中进行扩散并逐渐与吸附在固相表面的抗体结合。同时,标记抗体也需要经过相同的扩散结合过程,才能形成抗体-抗原标记的抗体复合物,所以需要很长时间。因此,这项技术实现了名副其实的POCT。原理:将氯金酸(HAuCl4))还原法制成一定直径的金溶胶颗粒(胶体金),用金黄色葡萄球菌蛋白(SPA)或抗体标记,进行蛋白质印迹、免疫组化定位或快速免疫渗透和免疫层析实验。

金标免疫过滤技术的原理与一般免疫斑点试验相同。它还用已知的抗原或抗体包被NC膜,然后使用金标记的抗体或抗原进行快速快速测定。阳性时为胶体金。红色的。改进之处是使用了渗滤装置,更加方便。金标免疫层析是利用NC膜条状纤维的毛细管作用,使样品在涌动过程中与金标和包被在NC上的抗原或抗体结合,出现有色阳性信号。胶体金的制备:溶液中的金颗粒呈圆形,边缘平坦,边界清晰。金颗粒表面带有大量负电荷。由于静电的排斥力,它在水中保持稳定状态,形成稳定的胶体,故称为胶体金胶体金的生产方法有白磷还原法、抗坏血酸还原法、柠檬酸三钠还原法和鞣酸-柠檬酸三钠还原法。通过改变反应体系中氯金酸与还原剂的比例(即增加或减少还原剂的用量),可以获得不同粒径的金颗粒。但是前两种方法制备的金颗粒粒径不均匀,所以目前比较常用后两种方法,采用Frens标准法柠檬酸三钠还原法:(1)取0、01% HAuCl4溶液50mL,加热煮沸,然后快速加入1%柠檬酸三钠溶液0.5mL。(2)约过25s沸腾的溶液变成淡蓝色,大约70s后,蓝色突然变成鲜红色,(3)Continue 煮沸约5分钟后反应结束。(4)冷却后,用0.1MK2CO3溶液调节pH至所需pH(5)之后,延长反应时间或加入柠檬酸三钠不影响实验结果。

本站声明:本网站尊重并保护知识产权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果我们转载的作品侵犯了您的权利,请在一个月内通知我们,我们会及时删除。

Copyright 华清诚信添加剂资讯网 All Rights Reserved. 版权所有

网站地图 |站点地图