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胶体金法的检测原理

时间:2021-05-20 11:06:51|浏览:

胶体金是一种常用的标签技术。这是一种新型的免疫标记技术,使用胶体金作为示踪剂应用于抗体抗原。它有其独特的优势。近年来,它已被广泛用于各种生物学研究中。临床上几乎所有的免疫印迹技术都使用其标记。同时,它可用于流式细胞仪,电子显微镜,免疫学,分子生物学以及生物芯片。

1971年,福克(Faulk)和泰耶(Taytor)将胶体金引入免疫化学。从那时起,免疫胶体金技术作为一种新的免疫学技术已广泛应用于生物医学的各个领域。目前在医学检测中的应用主要是免疫色谱法和斑点免疫金滤过法DIGFA,它们用于检测HBsAg,HCG和抗双链DNA抗体等,具有简便,快速,准确和无污染的特点。

免疫胶体金技术的基本原理:

胶体金是由氯金酸(HAuCl 4)在还原剂如白磷,抗坏血酸,柠檬酸钠,单宁酸等的作用下制成的,可以聚合成一定大小的金颗粒,在静电作用下变成一种金,一种稳定的胶态,形成一个带负电荷的疏水胶体碱液,由于静电而变成一种稳定的胶态,因此被称为胶体金。在碱性环境下可以与带正电荷的蛋白质分子基团形成可靠的结合,由于这些结合是静电结合胶体金法,因此它们不影响蛋白质的生物学特性。

混汞法提金 amalgamation_金胶体_胶体金法

胶体金不仅与蛋白质结合,而且还与许多其他生物大分子(如SPA,PHA,ConA等)结合。根据胶体金的一些数学性质,例如高电子密度,粒径,形状和颜色反应,加上缀合物的免疫学和生物学特性,胶体金被广泛用于免疫学,组织学,病理学和细胞生物学等领域。

胶体金标记实质上是一种涂覆过程,其中聚合物(例如蛋白质)被吸附到胶体金颗粒的表面上。吸附机理可以是胶体金颗粒的表面带负电,并且蛋白质的带正电的基团由于静电吸附而牢固地结合。可以通过还原法由氯金酸容易地制备具有不同粒径,即不同颜色的各种胶体金颗粒。该球形颗粒对蛋白质具有很强的吸附功能,并且可以与葡萄球菌A蛋白,免疫球蛋白,毒素,糖蛋白,酶,抗生素胶体金法,激素,牛血清白蛋白多肽结合物等非共价结合。因此,它成为特别有用的工具在基础研究和临床试验中。

胶体金法_混汞法提金 amalgamation_金胶体

免疫金标记技术(Immunogold labeling techique)主要利用了金颗粒的高电子密度。在金标记的蛋白质的交界处,可以在显微镜下看到黑色和白色颗粒。结块时,肉眼可以看到紫色或粉红色的黑点,因此可用于定性或半定量快速免疫学检查。这种反应也可以通过沉积银颗粒而被放大,这称为免疫金银染色。

常用的免疫胶体金测量技术:

金胶体_胶体金法_混汞法提金 amalgamation

(1)免疫胶体金显微镜染色法

可以用胶体金标记的抗原对细胞悬液活检或组织切片进行染色,或者在胶体金标记的基础上,可以用银显影液增强标记,以便还原的银原子可以沉积在标记的分子上。金的表面可以显着提高胶体金标记的敏感性。

金胶体_胶体金法_混汞法提金 amalgamation

(2)免疫胶体金电子显微镜染色法

胶体金标记的抗原或抗原可以与阴性染色的病毒样品或薄组织结合,然后进行阴性染色。可用于病毒形态观察和病毒监测。

斑点免疫金渗滤法

(3)使用微孔膜(例如膜)作为载体,首先将抗体或抗原点在膜上,密封后添加待测样品,并用抗原测量相应的抗体或抗原洗涤后用胶体金标记。

(4)胶体金免疫层析法

将特异性抗体或抗原以条状固定在膜上,并且胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗原)被吸附在结合垫上。将要测试的样品添加到测试条一端的样品垫中时,通过毛细作用向前连接,将胶体金标记试剂溶解在结合垫上并相互反应,然后连接到固定的抗体或抗原区域,被测物质与金标记试剂的结合物将与之特异性结合,并被吞下并聚集在卷尺上,并且可以用肉眼观察显色的结果。该方法现已开发成诊断测试条,使用非常方便。

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