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α‑神经毒素在我国研究中的科学应用研究研究进展

时间:2021-12-31 08:21:01|浏览:

1. 本发明属于抗体工程及免疫分析领域,具体涉及一种蓝藻毒素sn311竞争法胶体金/纳米花免疫侧流层析检测卡。

背景技术:

2.我的国家是一个海洋大国。在实现海洋资源可持续发展的过程中,近岸海域有毒海洋生物的存在不可避免地对海洋作业者的生命健康构成威胁。因此,防治海洋生物的医疗工作、科学研究和军事维护具有重要的现实意义,因此有必要尽快开展针对海洋生物伤害的科学应用研究。

3.青环海蛇(hydrophis cyanocctus daudin)广泛分布于鲁南沿海地区,其蛇毒具有剧毒,主要成分为α

神经毒素和一些其他蛋白质,在α中起主要作用

神经毒素。α

神经毒素可与骨骼肌运动终板上的烟碱乙酰胆碱受体结合,从而阻断骨骼肌的神经肌肉接头传递。因此,青环海蛇咬伤会引起肌肉麻痹,进而导致呼吸肌麻痹,身体窒息而死。. 由于清环海蛇毒液采集难度大,对清环海蛇毒液的研究检测相对滞后。开展清环海蛇毒检测方法研究具有重要意义。

4.免疫胶体金层析技术的实现,还得益于其载体免疫胶体金层析试纸(immunochromatograph hic test strips, ictss),一种通过硝酸纤维素膜固定待测样品在受体位置可以与样品特异性结合,随着复合物随着流动的积累,胶体金的颜色在试纸上显现出来。这个过程通常只需要几分钟,因此这项技术大大减少。除了检测的时间成本外,再加上其操作简单、特异性强、灵敏度高,很快就会在科学研究中得到广泛应用。随着纳米材料技术的成熟,金属纳米粒子的应用越来越广泛。金属纳米粒子具有与纳米材料相同的光电特性及其独特的生物相容性。它们自然受到免疫学的关注。随着胶体金的广泛应用,其在科学研究中的应用更加广泛。由于离子层的静电作用,胶体金在溶液中以胶体分散状态出现。胶体金纳米粒子作为标记材料,制备工艺简单,稳定性强,粒子分散性好,光学性能优良,在免疫标记方法中具有独特的优势。金纳米花作为一种新型的高催化胶体金技术,近年来发展迅速。金纳米花是在胶体金的基础上,通过种子生长法将胶体金颗粒放大形成的花状纳米颗粒。更显着的光学消化系数和催化活性在一定程度上大大提高了标记检测的灵敏度。目前制备金纳米粒子的方法包括物理合成和化学合成,但化学合成中的液体还原法由于操作简单,也被称为种子生长法,受到广大研究人员的青睐。种子生长法是在胶体金颗粒的基础上使用还原氯金酸,在表面形成大的不规则金纳米花。实验中以对苯二酚为还原剂,控制和合成不同粒径的纳米花。

技术实现要素:

5. 本发明的目的是提供一种快速特异的蓝藻毒素sn311竞争法胶体金/纳米花免疫侧流层析检测卡,可以实现蓝藻毒素检测sn311的快速灵敏检测。

6. 为达到上述目的,本发明提供一种蓝环海蛇毒素sn311竞争法胶体金/纳米花免疫侧流层析检测卡,该检测卡包括样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸收垫和塑料卡壳;硝酸纤维素膜上设有质控线(c线)和检测线(t线),质控线喷有山羊抗鼠igg抗体,检测线上包覆花青毒素sn311抗原;金标签垫包含胶体金/纳米花标记的抗花青素毒素 sn311 单克隆抗体。

7. 金标垫中所含的胶体金/纳米花标记的抗清环海蛇毒sn311单克隆抗体是胶体金/纳米花标记的抗清环海蛇毒sn311单克隆igg抗体溶液。通过喷金点膜机以每100mm/s和2μl/cm的喷镀速度喷在金标垫上得到。

8.胶体金的制备方法是:将1g haucl4溶于100ml ddh2o中得到1wt%的氯金酸水溶液,然后将1ml/管均匀分配到1.5ml无菌ep管中,用锡纸封好,放置

20℃冰箱保存备用;将1ml 1wt%氯金酸水溶液溶于100ml ddh2o中,混匀煮沸,再加入2ml 1wt%柠檬酸三钠溶液,继续加热煮沸7分钟,观察氯金酸水溶液的颜色溶液逐渐稳定为酒红色。室温放置冷却后,用无菌ddh2o定容至100ml,即得胶体金溶液。

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