手机版 欢迎访问华清诚信添加剂资讯网(www.hqcx.com)网站

当前位置:主页 > 胶体百科 >

应用盐霉素单克隆抗体研制出一种能够检测动物源性霉素的胶体金免疫层析试纸条

时间:2022-01-01 08:19:01|浏览:

□ 黄宝兵大同综合检验检测中心

摘要:本研究使用盐霉素单克隆抗体开发胶体金免疫层析试纸条,可检测动物源性食品中的盐霉素。检出限为20μg/kg,检测时间仅为15min。 ,假阳性率和假阴性率均为0,符合《兽药残留检测试剂盒(条、卡)技术数据要求和审查程序》的要求。该试纸条可应用于初级实验室大量样本的检测,具有实际意义,目前尚无免疫学方法的文献报道,具有创新性。

关键词:盐霉素,胶体金免疫层析试纸条,快速检测

简介

盐霉素是一种聚醚类抗生素,不仅常用于预防鸡、猪等家畜的球虫病,还可作为猪等家畜的生长促进剂。不法的畜主为了获得更高的利润,会过度使用盐霉素,导致动物源性食品中的盐霉素超标,进而影响人体健康。因此,有必要对动物源性食品中的盐霉素进行检测。目前,检测盐霉素的方法主要有高效液相色谱柱后衍生法、UPLC-MS/MS法、液相色谱-电喷雾串联质谱法等仪器方法[1-6],但很少有快速检测的方法。方法。方法。上述仪器检测方法耗时长,单台仪器成本超过百万元,难以用于基础实验室的检测工作。胶体金免疫层析试纸属于快速检测方法,检测时间小于30分钟,试纸成本从几元到几十元不等,非常适合基层实验室的大规模检测工作本研究开发了一种检测盐霉素的胶体金免疫层析试纸条,可检测动物源性食品中盐霉素抗生素残留,具有较高的实际应用价值。

1 材料和方法

1.1 材料和仪器

盐霉素、马杜霉素、红霉素、泰乐菌素、莫能菌素等标准品(纯度≥95%),购于北京标准材料研究中心;氯金酸(HAuCl4·3H2O),购自美国Sigma公司;柠檬酸三钠,购自北京百信试剂公司。

1.2 种方法

1.2.1 胶体金的制备

取100mL 0.01%氯金酸水溶液,加热至沸腾;边搅拌边准确加入1%柠檬酸三钠溶液1.5mL;待氯金酸水溶液变为酒红色后,继续煮沸15分钟,冷却后4℃避光保存[7-10]。

1.2.2 盐霉素单克隆抗体-胶体金标记物的制备

在磁力搅拌下,用0.2mol/L Na2CO3溶液将胶体金溶液的pH值调节至7.2,每ml胶体金溶液中加入50μg盐霉素单克隆抗体,混合均匀,静置10分钟,加入10% BSA使胶体金溶液的体积百分比为1%,静置10分钟。然后离心、洗涤、重悬,4℃备用[7-10]。

1.2.3 偶联物释放垫的制备

将偶联物释放垫浸泡在含有牛血清白蛋白(缓冲液中牛血清白蛋白浓度为0.5%)、pH值7.2、0. 5mol/L磷酸盐缓冲液,均匀浸泡1h,37℃烘烤3h备用。用Isoflow点样仪将制备好的盐霉素单克隆抗体胶体金标记均匀喷在偶联物释放垫上,每1cm偶联物释放垫喷0.01mL盐霉素单克隆抗体-胶体金标记后置于37℃环境(湿度

1.2.4 反应膜的制备

将盐霉素原包衣包覆在反应膜上形成检测线,将山羊抗鼠抗抗体包覆在反应膜上形成质控线[7-10]。

包被过程:将盐霉素包被源用磷酸盐缓冲液稀释至10mg/mL,用Isoflow膜点样仪包被在硝酸纤维素膜上的检测线(T线)上,包被量0. 8μL/cm;用0.01mol/L,pH 7.4磷酸盐缓冲液将山羊抗鼠抗体稀释至200μg/mL,用Isoflow膜点样仪将其涂在质控线(线C) 在硝化纤维膜上,包被量1.0μL/cm。涂覆后的反应膜在37℃下干燥2h,即可使用[7-10]。

1.2.5 吸水垫样品的制备

将样品吸收垫置于含有 0.5% 牛血清白蛋白(体积分数)、pH 7.2、0.1mol/L 的磷酸盐缓冲液中2h,37℃烘烤2h,备用[7-10]。

1.2.6 检测方法

用移液管吸取70μL待测样品溶液,垂直滴入样品孔,液体流动时开始计时,反应5~10min。根据示意图确定结果或通过胶体金分析仪读取测试结果。其他时间解释无效[7-10]。

本站声明:本网站尊重并保护知识产权,根据《信息网络传播权保护条例》,如果我们转载的作品侵犯了您的权利,请在一个月内通知我们,我们会及时删除。

Copyright 华清诚信添加剂资讯网 All Rights Reserved. 版权所有

网站地图 |站点地图