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胶体金法检测平台什么是胶体金?技术优势与不足优势

时间:2022-01-07 08:18:50|浏览:

胶体金检测平台

什么是胶体金?

胶体金(colloidal gold)是氯金酸(HAuCl4))在白磷、抗坏血酸、柠檬酸钠、鞣酸等还原剂的作用下,金离子被还原聚合成一定尺寸金颗粒。它由基本晶核(由11个金原子组成的二十面体)和外围的双离子层(内层为负离子层AuCl2-,外层为带正电的H+)组成。由于静电作用,金颗粒相互排斥,悬浮成稳定的胶体状态,形成带负电的疏水胶体溶液,故称为胶体金。胶体金具有高电子密度,可以与多种生物大分子结合。在同位素和酶之后,它是一种常用于免疫标记技术的非放射性示踪剂。胶体金的粒径一般在1-100nm之间,可以均匀稳定地分散在液体中,呈球形小颗粒或椭圆形大颗粒。最外层的胶体金颗粒能吸附大量的正离子,能均匀地分散在溶液中。

由于胶体金表面带负电,可以通过静电相互作用在表面标记带正电的抗原和抗体。

胶体金法检测原理

特异性抗体固定在膜条(T线)上,胶体金标记试剂吸附在结合处(金垫)。当待测抗原加入试纸一端的样品垫时,样品通过毛细作用向前移动,使结合垫上的胶体金标记试剂溶解并相互反应,然后移动到固定的抗原或抗体区域,分析物的结合物和金标记试剂会与其特异性结合并被截获并聚集在试纸上,肉眼可以观察显色结果。

胶体金技术的优缺点

优势

快速:所有反应可在15分钟内完成;

操作简单:方便个人自检或医院检测;

成本低:无需特殊设备;

稳定性好:试剂有效期可达两年以上;

缺点

与ELISA、化学发光等方法相比,灵敏度较低;

容易出现误报和漏报;

有一个 HOOK 效果;

胶体金试剂条组成

胶体金试纸条主要由样品垫、金垫、硝酸纤维素膜(NC膜)、吸水纸等自上而下相连,粘贴在PVC底板上。

影响

一个。样品垫:检测样品的滴落位置,对测试样品有一定的过滤和缓冲作用,减少样品中离子强度或pH值对测试结果的干扰。

湾 金垫:将胶体金标记的抗体通过干燥固定在玻璃纤维素膜上,以跟踪抗体与抗原之间的反应。

C。硝酸纤维素膜:膜上预涂检测线和质控线,可结合胶体金标记物的免疫反应,使胶体金在检测线上积聚,判读依据检测线结果的显色。

d. 吸水垫:液体样品通过吸水向上流动,带动金垫的金标抗体向上移动,从而与检测线的抗原发生反应。

胶体金试纸条的生产工艺

胶体金的制备

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溶液中的金颗粒呈圆形,边缘平坦,边界非常清晰。金颗粒表面带有大量负电荷。由于静电的排斥力,它在水中保持稳定状态,形成胶体金。胶体金的制备方法有白磷还原法、抗坏血酸还原法、柠檬酸三钠还原法和鞣酸-柠檬酸三钠还原法。通过改变反应体系中氯金酸与还原剂的比例,可以获得不同粒径的金颗粒。但是,前两种方法制备的金颗粒粒径不均,目前常用后两种方法。

柠檬酸三钠还原法制备胶体金工艺

以下流程供参考:

一个。将 100ml 超纯水倒入 250ml 锥形瓶中

湾 滴加1.0%氯金酸溶液1.0ml,置于磁力搅拌器中不断搅拌,加热至沸腾

C。快速加入1.0%柠檬酸三钠溶液1.8ml并搅拌,此时溶液逐渐由浅黄色变为灰黑色,最后变为橙红色

d. 待溶液变成橙红色后,继续加热15分钟

e. 冷却至室温,用0.1mol/ml K2CO3 将溶液的 pH 值调至 5 左右

F。超纯水定容至100ml后,4℃保存于棕色瓶中备用

此时制备的胶体金溶液应清澈透亮,色泽均匀,无异物,无浮金现象。

预防措施:

1)玻璃器皿清洗

制金前,将玻璃器皿在王水或铬酸溶液中浸泡24h胶体化学,用自来水冲洗胶体化学,然后用洗涤剂洗涤3次,自来水3次,蒸馏水3次,双蒸水3次。

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2) 试剂的制备

必须使用双蒸水。氯金酸溶液在4℃下可保存1年左右,还原剂柠檬酸三钠需新鲜使用。

抗原/抗体诊断材料的胶体金标记

胶体金打标原理

在碱性条件下,胶体金颗粒表面带负电荷,可在抗原/抗体带正电荷的基团之间产生静电引力并牢固结合。这种组合对标记抗原/抗体的生物活性没有明显影响。环境pH值和离子强度是影响胶体金和抗原/抗体吸附的主要原因。胶体金颗粒的大小、蛋白质的分子量和浓度也会影响蛋白质的吸附。

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